PCR反應:
首先,在PCR反應管或板中組裝PCR反應混合物,包括待檢測的DNA或RNA模板、引物、熒光標記的探針或染料、聚合酶等。
PCR反應過程包括變性、退火和延伸步驟,通過循環(huán)加熱和降溫來擴增目標DNA或RNA序列。
熒光信號檢測:
在PCR反應過程中,熒光標記的探針或染料與目標序列結(jié)合,產(chǎn)生熒光信號。
實時熒光定量PCR分析儀通過光學系統(tǒng)檢測PCR反應管或板中的熒光信號,熒光信號的強度與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比。
數(shù)據(jù)采集和分析:
控制系統(tǒng)通過控制溫度循環(huán)和光學系統(tǒng),實時監(jiān)測PCR反應過程中的熒光信號。
數(shù)據(jù)分析軟件會記錄并分析熒光信號的變化,繪制熒光信號曲線,根據(jù)標準曲線計算出樣本中目標序列的起始數(shù)量。
定量分析:
通過比較待檢測樣本的熒光信號與標準曲線上的對應值,可以確定待檢測樣本中目標序列的起始數(shù)量。
實時熒光定量PCR分析儀可以提供定量結(jié)果,通常以基因拷貝數(shù)或相對表達量的形式呈現(xiàn)。
結(jié)果輸出:
分析軟件可以將定量結(jié)果輸出到計算機或打印機,以便后續(xù)數(shù)據(jù)分析和報告生成。
結(jié)果通常包括目標序列的數(shù)量、PCR曲線、熒光信號曲線等信息。
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